鬼筆環(huán)肽-熒光素標(biāo)記

這種綠色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（相當(dāng)于FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽）會選擇性結(jié)合F-肌動蛋白。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中用于標(biāo)記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。

操作步驟

1.制備1000 X鬼筆環(huán)肽DMSO儲備液：將30μLDMSO加入小瓶中。

2.制備1X鬼筆環(huán)肽結(jié)合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽結(jié)合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。

注意1：鬼筆環(huán)肽結(jié)合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應(yīng)等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽結(jié)合物工作溶液的濃度的制備需要根據(jù)實(shí)際而定。

3.染色細(xì)胞：

3.1執(zhí)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細(xì)胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩诠潭ㄟ^程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定細(xì)胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞（步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液（來自步驟1）加入固定的細(xì)胞（來自步驟2.2或2.3）中，并在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽結(jié)合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。