蛋白酶熒光底物Gly-Pro-AMC

Gly-Pro-AMC是用于檢測二肽酰多肽酶IV (DPPIV)的高靈敏度熒光底物，一種絲氨酸蛋白酶，能夠從倒數第二位上是L-脯氨酸或者L-丙氨酸的多肽上剪切其N(xiāo)末端的二肽酰。DPPIV是表達于多種細胞（包括上皮細胞，內皮細胞和淋巴細胞）表面的多功能蛋白質(zhì)。它與T細胞活化抗原CD26和腺嘌呤核苷脫氨基酶（腺苷脫氨酶）結合蛋白具有同一性，它以可溶性狀態(tài)釋放于血漿中。CD26/DPPIV的底物包括多種含有脯氨酸的多肽，例如生長(cháng)因子、趨化因子、神經(jīng)肽和血管活性肽。DPPIV參與免疫調控，信號轉導和細胞凋亡，并且在腫瘤的發(fā)展中發(fā)揮重要作用。重要的是，DPPIV是II型糖尿病的治療靶點(diǎn)，由于其作為血清蛋白酶，能夠剪切多肽胰高血糖素家族中腸降血糖素荷爾蒙，以此調節體內葡糖糖的穩定。研究顯示一種DPPIV抑制劑可以增強葡糖糖衰減的耐受力。用帶有Gly-Pro-AMC的DPPIV檢測是一種簡(jiǎn)單、快速，靈活的檢測法，是理想的高通量篩選方法。與DPPIV檢測法相比，這種檢測法增強了檢測靈敏度，使研究者可以用更少的酶，同時(shí)獲得恰當的Z值。這種單一性的酶偶聯(lián)形式使用非常方便，只需要在檢測樣品中添加一種單一的試劑；在20inm內可以獲得最大感光值，并且其單一產(chǎn)物非常穩定。

溶液制備 

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1 Gly-Pro-AMC：
在DMSO中制成10至25 mM的Gly-Pro-AMC儲備溶液，避光。 注意：儲備溶液應及時(shí)使用； 應將所有未使用的溶液等分，并在-20℃冷凍。注意：避免重復凍融循環(huán)，并避免光照。 

2.工作溶液

Gly-Pro-AMC：
取出一個(gè)小瓶，并用您選擇的測定緩沖液（例如50 mM Tris-HCl，pH 7.5，1.0 mM DTT）稀釋儲備溶液，制成50至100 μM測定溶液。

樣品操作及分析

1.將等體積的DPPIV標準品或樣品與測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時(shí)。

2.在Ex / Em = 380/500 nm處監測熒光增加。