PhosphoWorks 發(fā)光法ATP檢測試劑盒 *溫和發(fā)光*

 PhosphoWorks 發(fā)光法ATP檢測試劑盒是用于檢測ATP的試劑盒，腺苷三磷酸（ATP）在細胞能量學(xué)，代謝調節和細胞信號傳導中起重要作用。 PhosphoWorks ATP檢測試劑盒提供快速，簡(jiǎn)單和均勻的發(fā)光檢測，用于測定哺乳動(dòng)物細胞中的細胞增殖和細胞毒性。可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行測定。 該測定的高靈敏度允許在許多生物系統，環(huán)境樣品和食物中檢測ATP。 這種PhosphoWorks ATP檢測試劑盒具有長(cháng)達4小時(shí)的穩定發(fā)光信號。 它具有穩定的發(fā)光，不需要混合或分離，并配制成具有最小的手動(dòng)操作時(shí)間。 

溶液制備

1.將整瓶10 mL反應緩沖液（組分C）轉移到ATP（組分B）中并充分混合。

2.將20μLATP監測酶（組分A）加入到組分B + C的瓶中并充分混合以制備ATP工作溶液。 注意：避免來(lái)自外源生物來(lái)源的潛在污染。

樣品試驗方案

1運行ATP測定：

1.1用測試化合物處理細胞（或樣品），在96孔板中加入10μL10X化合物，或在所需化合物緩沖液中加入5μL5X化合物用于384孔板。對于空白孔（沒(méi)有細胞的培養基），加入相應量的化合物緩沖液。

1.2將細胞板在37℃，5％CO 2培養箱中孵育所需的一段時(shí)間，例如24,48或96小時(shí)。

1.3向每個(gè)孔中加入100μL（96孔板）或25μL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室溫下孵育10-20分鐘。

1.5用標準發(fā)光計監測發(fā)光強度。

2.生成標準ATP校準曲線(xiàn)：

        如果需要計算樣品中ATP的絕對量，則應與上述分析一起生成ATP標準曲線(xiàn)。

2.1通過(guò)包含不含ATP的樣品（作為對照）用于測量背景發(fā)光，在含有0.1％BSA的PBS緩沖液中制備一系列ATP稀釋液。注意：通常ATP濃度從1 nM到10μM是合適的。

2.2將相同量的稀釋的ATP溶液加入空板中（對于96孔板為100μL或對于384孔板為25μL）。

2.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4將反應混合物在室溫下孵育10至20分鐘。

2.5用標準光度計監測發(fā)光強度。

2.6生成ATP標準曲線(xiàn)。