半胱氨酸蛋白酶在細胞凋亡或程序性細胞死亡中是必需的，在發(fā)育和成年生活的大多數其他階段，并且因其在細胞中的作用而被稱(chēng)為“劊子手”蛋白質(zhì)。免疫系統中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴細胞的成熟。細胞凋亡失敗是腫瘤發(fā)展和自身免疫疾病的主要原因之一。半胱天冬酶也參與缺血和阿爾茨海默病。凋亡caspase有兩種類(lèi)型：引發(fā)劑和效應劑。 啟動(dòng)子半胱天冬酶（例如，CASP2，CASP8，CASP9和CASP10）切割效應半胱天冬酶的無(wú)活性前體形式，從而激活它們。效應子半胱天冬酶（例如，CASP3，CASP6，CASP7）依次切割細胞內的其他蛋白質(zhì)底物，以觸發(fā)細胞凋亡過(guò)程。該級聯(lián)反應的起始受半胱天冬酶抑制劑的調節。
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格 |
E0102 | 胱天蛋白酶Caspase 37 熒光底物Ac-DEVD-AFC 綠 | 5 mg | 1236RMB |
操作方法
1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定
1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。
1.2制備2X半胱天冬酶底物（50μM）測定溶液，如下所示：
50 L基質(zhì)原液
100L DTT（1M）
400L EDTA（100 mM）
10mL Tris緩沖液（20mM），pH = 7.4
1.3將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液（來(lái)自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時(shí)。
1.4使用熒光酶標儀檢測熒光，或使用吸光度酶標儀檢測吸光度。
2.細胞Caspase檢測使用細胞滲透FMK半胱天冬酶探針
2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。
2.2根據需要對細胞進(jìn)行處理。
2.3通過(guò)用20mM Hepes緩沖液（HHBS）稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液（來(lái)自步驟2.1），制備2X可滲透的半胱天冬酶底物（20μM）測定溶液。
2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液（來(lái)自步驟2.3）混合等體積的處理細胞，并將細胞在37℃，5％CO 2培養箱中孵育至少1小時(shí)。
2.5用HHBS洗滌細胞至少一次。
2.6用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。
3.細胞Caspase檢測使用細胞滲透性FMK Caspase探針（僅適用于＃13470-13476）
3.1通過(guò)向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。
3.2根據需要對細胞進(jìn)行處理。
3.3將250 X DMSO儲備溶液（來(lái)自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL細胞）添加到細胞溶液中，并將細胞在37°C，5％CO 2培養箱中孵育1 小時(shí)。
3.4用HHBS洗滌細胞至少一次。
3.5用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。
客服1 