Cell Meter 磷脂酰絲氨酸細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 適合于流式細胞檢測

Cell Meter磷脂酰絲氨酸細胞凋亡檢測試劑盒 *綠色熒光 適合于流式細胞檢測*通過(guò)對磷脂酰絲氨酸(PS)進(jìn)行檢測，而實(shí)現細胞凋亡的檢測。在凋亡細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）從胞內移位到胞外表面，因此PS出現在細胞的外表面可以作為細胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過(guò)其形態(tài)學(xué)改變來(lái)測定。本試劑盒實(shí)驗使用我們獨有的Apopxin PS傳感器，它是一種小分子PS傳感器。一旦與膜上PS結合，發(fā)出綠色熒光。這種特殊的檢測試劑盒最適合通過(guò)流式細胞儀的FITC通道（綠色熒光）檢測細胞凋亡。目前商業(yè)化各種Annexin V凋亡檢測試劑盒一般是將Annexin V進(jìn)行傳統的熒光團（FITC、Cy3）標記后作為熒光探針，通過(guò)檢測細胞凋亡早期細胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS），從而實(shí)現對細胞凋亡的檢測。然而目前的檢測受到熒光顏色、熒光強度和檢測靈敏度等因素的限制。Cell Meter Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit則采用Apopxin PS Sensor代替了傳統的Annexin V，前者能特異性的結合PS，并且其親和力高于A(yíng)nnexin V，因此其穩定性和靈敏度更高，同時(shí)其偶聯(lián)的熒光基團具有更好的光穩定性和強度，因此檢測效果更靈敏快捷，尤其適合自動(dòng)化和高通量分析。

操作步驟

1.用測試化合物處理細胞一段所需的時(shí)間（用喜樹(shù)堿處理的Jurkat細胞4-6小時(shí)）以誘導細胞凋亡。注意：對粘附細胞的Apopxin 結合流式細胞術(shù)分析不是常規檢測，因為在細胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。

2.離心細胞，得到1-5×10⁵個(gè)細胞/管。

3.將細胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μLApopxin Green（組分A）加入細胞中。

5.可選：將2μL100X碘化丙啶（組分C）加入細胞中，用于壞死細胞。

6.在室溫下孵育20至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監測熒光強度。當碘化丙啶加入細胞時(shí)，使用FL2通道測量細胞活力。