Cell Meter磷脂酰絲氨酸細(xì)胞凋亡檢測試劑盒 *綠色熒光 適合于流式細(xì)胞檢測*通過對(duì)磷脂酰絲氨酸(PS)進(jìn)行檢測，而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞凋亡的檢測。在凋亡細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）從胞內(nèi)移位到胞外表面，因此PS出現(xiàn)在細(xì)胞的外表面可以作為細(xì)胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過其形態(tài)學(xué)改變來測定。本試劑盒實(shí)驗(yàn)使用我們獨(dú)有的Apopxin PS傳感器，它是一種小分子PS傳感器。一旦與膜上PS結(jié)合，發(fā)出綠色熒光。這種特殊的檢測試劑盒最適合通過流式細(xì)胞儀的FITC通道（綠色熒光）檢測細(xì)胞凋亡。目前商業(yè)化各種Annexin V凋亡檢測試劑盒一般是將Annexin V進(jìn)行傳統(tǒng)的熒光團(tuán)（FITC、Cy3）標(biāo)記后作為熒光探針，通過檢測細(xì)胞凋亡早期細(xì)胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS），從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測。然而目前的檢測受到熒光顏色、熒光強(qiáng)度和檢測靈敏度等因素的限制。Cell Meter Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit則采用Apopxin PS Sensor代替了傳統(tǒng)的Annexin V，前者能特異性的結(jié)合PS，并且其親和力高于Annexin V，因此其穩(wěn)定性和靈敏度更高，同時(shí)其偶聯(lián)的熒光基團(tuán)具有更好的光穩(wěn)定性和強(qiáng)度，因此檢測效果更靈敏快捷，尤其適合自動(dòng)化和高通量分析。

操作步驟

1.用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間（用喜樹堿處理的Jurkat細(xì)胞4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意：對(duì)粘附細(xì)胞的Apopxin 結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析不是常規(guī)檢測，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。

2.離心細(xì)胞，得到1-5×10⁵個(gè)細(xì)胞/管。

3.將細(xì)胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μLApopxin Green（組分A）加入細(xì)胞中。

5.可選：將2μL100X碘化丙啶（組分C）加入細(xì)胞中，用于壞死細(xì)胞。

6.在室溫下孵育20至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監(jiān)測熒光強(qiáng)度。當(dāng)?shù)饣ぜ尤爰?xì)胞時(shí)，使用FL2通道測量細(xì)胞活力。